MagVigen™ FFPE DNA Extraction Kit

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產(chǎn)品內(nèi)容

• mag vigen FFPE DNA捕獲納米顆粒
• 組織溶解緩沖液
• 蛋白酶K
• 蛋白酶K緩沖液
• 清洗緩沖液1原液
• 洗脫緩沖液

所需材料

• 異丙醇
• 乙醇
• 磁性架(NVIGEN目錄號(hào)A20006)

協(xié)議

• 注意:




• 使用您自己的方案去除FFPE樣本中的石蠟。
• 檢查組織溶解緩沖液，確保沒(méi)有沉淀。如果有，加熱到40°C使其溶解。

1. 制備清洗緩沖液1溶液:

   
   

   根據(jù)表1計(jì)算所需的清洗緩沖液1的量。向每500微升清洗緩沖液1儲(chǔ)備溶液中加入500微升異丙醇。




2. 制備蛋白酶K溶液:

   
   

   向裝有蛋白酶K的試管中加入蛋白酶K緩沖液。輕輕攪拌直至蛋白酶K溶解。將蛋白酶K溶液儲(chǔ)存在-20°C的冰箱中。




3. 向FFPE樣品中加入200μl或400μl的細(xì)胞溶解緩沖液。遵循表1中的試劑體積。




4. 向試管中加入準(zhǔn)備好的蛋白酶K溶液，輕輕渦旋以充分混合，并在55°C下孵育30分鐘，冷卻至室溫。




5. 在80°C下孵育15分鐘，然后冷卻至室溫。




6. 向裂解緩沖液中加入MagVigen DNA捕獲納米顆粒。渦旋混合均勻。




7. 向裂解反應(yīng)中加入異丙醇，渦旋混合

   
   

   在室溫下孵育45分鐘。




8. 將反應(yīng)管放在磁架上沉淀珠子，直到溶液澄清(約10分鐘)。




9. 慢慢去除上層清液。注意不要拿走任何珠子，盡可能多地取出溶液。




10. 從磁鐵上取下試管，加入清洗緩沖液1。通過(guò)移液或渦旋混合。短暫旋轉(zhuǎn)，使溶液到達(dá)試管底部。在磁性架上沉淀珠子，直到溶液澄清(大約3分鐘)，然后取出溶液。




11. 加入洗滌緩沖液2 (80%乙醇)，通過(guò)移液混合。短暫旋轉(zhuǎn)，使溶液到達(dá)試管底部。在磁性架上沉淀珠子，等到溶液澄清后取出溶液。




12. 重復(fù)步驟11，用80%乙醇再清洗一次。




13. 將試管放在磁性架上，風(fēng)干顆粒約1分鐘。




14. 向珠子中加入所需量的洗脫緩沖液，上下吸取，直到所有沉淀全重新分散。




15. 將試管放在磁性支架上1分鐘。




16. 小心地從微量離心管底部收集上清液，不要擾動(dòng)沉淀。上清液含有提取的DNA。

表1。每個(gè)步驟中使用的試劑體積。

MagVigen™ FFPE DNA Extraction Kit