MagVigen™ – Streptavidin DNA Capture

MagVigen鏈霉親和素DNA捕獲納米顆?？捎糜谥苯訌娜芤褐胁东@特定的RNA或DNA序列。納米顆?？梢酝ㄟ^鏈霉親和素和生物素之間的高親和力相互作用結(jié)合到任何生物素化的DNA上。MagVigen鏈霉親和素DNA捕獲納米顆?？筛咝Щ厥针p鏈和單鏈DNA。短時(shí)間的孵育后，DNA產(chǎn)物被納米粒子捕獲。產(chǎn)生的納米顆粒-寡聚物復(fù)合物可以通過磁體與樣品的其余部分分離。可以使用洗脫緩沖液從納米顆粒中洗脫保留的基因組材料。

MagVigen鏈霉親和素DNA捕獲納米顆粒能夠從分析樣品(如細(xì)胞裂解物、全血)的鹽和其他污染物中純化DNA產(chǎn)物。純化的DNA產(chǎn)物可以通過凝膠電泳、PCR定量和測(cè)序進(jìn)一步分析。

產(chǎn)品內(nèi)容:

• Cat# 61002: MagVigen鏈霉親和素DNA捕獲納米顆粒

Cat# K61002還包括:

• DNA檢測(cè)緩沖液
• 結(jié)合緩沖液1
• 結(jié)合緩沖液2

所有材料應(yīng)儲(chǔ)存在4°c下。

保質(zhì)期:6個(gè)月

草案

DNA純化

該方案被優(yōu)化用于從分析樣品(例如細(xì)胞裂解物、全血或血漿)中純化生物素化的DNA樣品。

DNA捕獲

制備磁珠再分散緩沖液:

1. 將600μl DNA檢測(cè)緩沖液加入1400μl H2O中，制備磁珠再分散緩沖液。

準(zhǔn)備清洗緩沖液:

2. 將2.4毫升DNA檢測(cè)緩沖液加入17.6毫升H2O中，制備清洗緩沖液。

準(zhǔn)備磁珠:

3. 從倉庫中取出MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，并將其置于室溫。




4. 使用前渦旋MagVigen鏈霉親和素納米顆粒10-20秒。

對(duì)于高達(dá)100皮摩爾的生物素化DNA，使用20μl的MagVigen鏈霉親和素納米顆粒。

5. 取出MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，放入干凈的1.5毫升反應(yīng)管中。




6. 使用磁鐵收集MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，并去除上清液。

注意: 在微量離心管的側(cè)面應(yīng)該可以看到含有深棕色納米顆粒的透明沉淀物。

7. 將納米顆粒重新懸浮在等體積的磁珠再分散緩沖液中。

雜交反應(yīng):

8. 將樣品在95°C下煮沸10分鐘，然后將樣品管放入干冰中5分鐘，然后短暫離心。




9. 按所述順序向DNA樣品中加入DNA檢測(cè)緩沖液、結(jié)合緩沖液1、生物素化DNA捕獲寡核苷酸、結(jié)合緩沖液2。




10. 將樣品在57°C(優(yōu)良溫度應(yīng)根據(jù)探針寡核苷酸長(zhǎng)度和序列進(jìn)行測(cè)試)下孵育2小時(shí)。。




11. 將樣品冷卻至室溫。

磁性Pull-Down:

12. 加入MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，室溫下在滾筒上孵育1小時(shí)。




13. 孵育后，使用磁鐵將捕獲DNA的納米顆粒從溶液中分離出來。




14. 用移液管小心移去上清液，注意不要干擾捕獲DNA的納米顆粒沉淀。




15. 通過將納米顆粒重新懸浮在57℃的溫洗滌緩沖液中，洗滌DNA捕獲的納米顆粒沉淀。




16. 使用磁鐵收集MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，并去除上清液。




17. 通過將納米顆粒重新懸浮在室溫的洗滌緩沖液中來洗滌DNA捕獲的納米顆粒沉淀。




18. 使用磁鐵收集MagVigen鏈霉親和素納米顆粒，并去除上清液。

洗脫:

19. 將納米顆粒重新懸浮于10 mM Tris緩沖液中，并保持所需體積。通過在80℃溫育5分鐘進(jìn)行洗脫。




20. 用磁鐵將納米顆粒從洗脫的DNA中分離出來。




21. 將含有DNA產(chǎn)物的上清液轉(zhuǎn)移到干凈的試管中。純化的DNA可用于隨后的評(píng)估。

使用的試劑示例。可以滴定磁珠數(shù)量以獲得優(yōu)良性能。

MagVigen™ – Streptavidin DNA Capture