單寧酶（TAN）測試盒

微量法100管/48樣

正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水解沒食子酸單寧中的酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖。

測定原理

使用抗氧化劑沒食子酸丙酯（PG）作為單寧酶酶促反應的底物，在270nn下測定底物PG反應前后的光密度變化,計算單寧酶酶活力。

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

試劑一：液體100mL×2瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1支，4℃保存；臨用前每支加入6mL試劑一，充分溶解后備用；用不完的試劑4℃保存；

粗酶液提取 

按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

液體樣本：直接取上清測定。

測定步驟

1、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長到270 nm，蒸餾水調零。

2、加樣表

混勻，40℃準確保溫10 min后，置95℃水浴中10 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻

混勻，取200uL至微量石英比色皿或96孔UV板中，270nm處讀取各管吸光值。計算ΔA=A對照-A測定。每個測定管需設個一個對照管。

注意：

1. 可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進行5min 95℃沸水浴處理。

2. 務必使用96孔UV板（非普通酶標板，普通酶標板只能透過可見光，不能透過紫外光，檢測波長小于340nm務必使用UV板）。

TAN活力單位的計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為y = 0.0058x + 0.0044，R2 = 0.9994；x為PG含量（µmol/L），y為吸光值。

1. 按樣本體積計算

單位的定義：40℃下每毫升粗酶液每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位。

TAN活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷V樣÷T

=34.48×( ΔA-0.0044）

2、按照蛋白濃度計算

單位的定義：40℃下每毫克蛋白每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位(U)。

TAN活性((µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷(V樣×Cpr)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044）÷Cpr

3、按照樣本鮮重計算

單位的定義：40℃下每克樣品每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位(U)。

TAN活性(µmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V反總÷0.01÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=34.48×(ΔA-0.0044）÷W

V反總：反應體系總體積，1mL； V樣：加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，10min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定回歸方程為y = 0.0029x + 0.0044，R2 = 0.9994；x為PG含量（µmol/L），y為吸光值。

1、按樣本體積計算

單位的定義：40℃下每毫升粗酶液每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位(U)。

TAN活性(µmol/min/mL)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷V樣÷T

=68.97×( ΔA-0.0044）

2、按照蛋白濃度計算

單位的定義：40℃下每毫克蛋白每分鐘水解減少1µmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位(U)。

TAN活性(µmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷(V樣×Cpr)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044）÷Cpr

3、按照樣本鮮重計算

單位的定義：40℃下每克樣品每分鐘水解減少0.01µmol底物PG所需要的酶量定義為一個酶活單位(U)。

TAN活性(µmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V反總÷0.01÷(V樣÷V樣總×W)÷T

=68.97×( ΔA-0.0044）÷W

V反總：反應體系總體積，1mL； V樣：加入樣本體積，0.05mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應時間，10min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進口貨物，最快交期1-2周。

4. 進出口貨物代理服務。

5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式，為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強網(wǎng)絡建設，提高公司內(nèi)部運作效率，為客戶提供方便、快捷的服務。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價格。

單寧酶（TAN）測試盒