測量蛋白質的紫外光吸收是微量蛋白質濃度和純度分析最直接的方法。芳香族氨基酸和許多蛋白質的殘基表現(xiàn)出很強的紫外線吸收，在 280nm 處達到峰值。吸收的光量與樣品的濃度成正比。使用 Beer-Lambert 方程，可以將蛋白質量化為這種吸收行為的一個因素。

直接 UV 吸光度測量是一種簡單有效的純化蛋白質方法，但它們并不是通用的定量方法。相反，分光光度法技術必須根據(jù)對分析物的理解以及樣品中是否存在可能干擾 280nm 直接定量的緩沖液或溶劑進行定制。

本文將探討用于蛋白質微量分析和生物化學應用的四種替代蛋白質定量分析。

二辛可寧酸 （BCA）

BCA 或 Smith 測定法是一種比色測定法，專為分析溶液中的蛋白質樣品而設計。在分光光度法分析之前，蛋白質與銅離子結合形成銅-二辛可寧酸 （Cu-BCA） 螯合物;一種紫色復合物，在色度強度和蛋白質濃度之間具有線性相關性。這種復合物可吸收 562nm 的光，并與去污劑兼容。

Bradford 檢測

Bradford 分析是用于微量分析的相對成熟的比色蛋白質定量工具之一。它基于帶正電荷的蛋白質與帶負電荷的考馬斯染料的結合。該復合物吸收 595nm 的光。然后可以將吸光度光譜與標準曲線進行比較，以確定蛋白質濃度。

Lowry 微量分析

改良的 Lowry 分析是一種銅基試劑，可在 650nm 波長下測量銅-蛋白質復合物的吸光度。與 Bradford 測定一樣，必須通過與測定標準曲線進行比較來估計結果。

皮爾斯 660

Pierce 660 分析設計用于對與染料-金屬復合物結合的蛋白質進行微量分析。它與包含去污劑和還原劑的溶液兼容，在 660nm 的波長處表現(xiàn)出吸收。

使用 DeNovix 進行微量分析

DS-11 系列分光光度計可在整個紫外-可見光譜范圍內(nèi)進行吸光度測量，使用 280nm 吸光度和市場上最常見的比色分析方法進行直接定量，能夠對蛋白質樣品進行微量分析。標準曲線功能增強了這一點，該功能繪制 2 – 8 條標準曲線，用于吸光度值的快速比較分析。DS-11 特別適用于定量低至 1 μL （μl） 樣品體積的 BSA、IgG 和定制蛋白質，并全面實施上述蛋白質檢測。